Preparación de buffer y muestra
La preparación de buffers y muestras forma parte del camino de aprendizaje de Nanopore Wiki. Este proceso controla la concentración iónica, el pH, el estado del analito, los contaminantes de fondo y la reproducibilidad de los experimentos.
Conceptos básicos
- La concentración de sal afecta la conductancia, el efecto de protección («screening»), la captura de partículas y el ruido («noise»).
- Los cambios en el pH modifican la carga de los poros, la carga del analito y la estabilidad de las proteínas.
- La agregación de muestras, la degradación, la transferencia de disolventes y las impurezas pueden dominar las señales.
- Se deben registrar la fecha de preparación, el lote utilizado, los procedimientos de filtrado y las condiciones de almacenamiento.
Flujo de trabajo de preparación
| Paso | Descripción |
|---|---|
| 1 | Defina la composición del buffer y el rango de concentración del objetivo. |
| 2 | Prepare controles en blanco y muestras de diluciones. |
| 3 | Comprobar la integridad de la muestra y el riesgo de agregación. |
| 4 | Registre todos los metadatos de preparación antes de realizar la medición. |
Aplicaciones típicas
- Experimentos con ADN, ARN, proteínas, péptidos, partículas y nanoporos de moléculas pequeñas.
- Solución de problemas de obstrucción, adsorción y tasas de eventos inconsistentes.
- Control de calidad de la biblioteca de secuenciación.
Peligros comunes
- Condiciones del búfer de copia entre sistemas porosos sin validación.
- Ignorando los disolventes portadores y la transferencia de sal.
- El uso de altas concentraciones puede provocar la obstrucción o la superposición de eventos.