Préparation du tampon et de l'échantillon
La « Préparation des tampons et des échantillons » fait partie de la voie d'apprentissage de Nanopore Wiki. La préparation des tampons et des échantillons permet de contrôler la concentration ionique, le pH, l'état de l'analyte, les contaminants présents dans l'échantillon, ainsi que la reproductibilité des expériences.
Concepts fondamentaux
- La concentration en sel affecte la conductivité, le phénomène de « screening », la capacité de capture des ions et le niveau de bruit (bruit électrique).
- Les changements de pH modifient la charge des pores, la charge de l'analyte et la stabilité des protéines.
- L'agrégation des échantillons, la dégradation des substances, le transfert de solvants, ainsi que les impuretés peuvent avoir un impact significatif sur les signaux mesurés.
- La date de préparation, le lot de traitement, les procédures de filtration ainsi que les conditions de stockage doivent être consignées.
Flux de travail de préparation
| Étape | Description |
|---|---|
| 1 | Définir la composition du tampon et la plage de concentration cible. |
| 2 | Préparez des contrôles vides ainsi que des dilutions d'exemple. |
| 3 | Vérifier l'intégrité de l'échantillon et le risque d'agrégation. |
| 4 | Enregistrez tous les métadonnées de préparation avant la mesure. |
Applications typiques
- Expériences sur l'ADN, l'ARN, les protéines, les peptides, les particules et les nanopores de petites molécules.
- Dépannage des problèmes de bouchage, d'adsorption et des taux d'événements incohérents.
- Contrôle de la qualité de la bibliothèque de séquençage.
Pièges courants
- Conditionnement du tampon de copie entre les systèmes poreux sans validation.
- Ignorer les solvants utilisés par le transporteur ainsi que les résidus de sel.
- L'utilisation d'une concentration élevée entraîne des événements qui se chevauchent ou qui bloquent le fonctionnement normal des systèmes.